MACAM MEDIUM DAN REAGENT

Medium Yeast Mannitol Agar

Komposisi :            1. Mannitol                            10  gram                                6. CaCO₃                                 3    gram

2. Ekstrak Khamir                 0,2 gram                                7. Congo Red 1%                  2,5 gram

3. K₂HPO₄                               0,5 gram                                8 Agar-agar                           15  gram

4. MgSO₄                                0.2 gram                                9. Aquadest                           1000  ml

5. NaCl                                    0,1 gram                                pH :7,4±0,2

Medium Cair Glucosa Extract Khamir (Glukosa Yeast Extract Broth)

Komposisi :            1. Trypton              10 gram                 4. Glukosa              5   gram

2. Yeast Extract     10 gram                 5. Aquadest           1000 ml

3. K₂HPO₄               5   gram                  pH :7,4±0,2

Medium Cair Tryptopan 1%

Komposisi :            1. Trypton              1 gram

2. Aquadest           100  ml                   pH :7,4±0,2

Medium cair MR-VP (Methyl Red – Voges Prouskauer)

Komposisi :            1. Pepton               7   gram                  3. K₂HPO₄               5   gram

2. Glukosa              5   gram                  4. Aquadest           1000 ml                 pH :7,4±0,2

Medium cair Tryptopan + Glukosa

Komposisi :            1. Tryptopan         10 gram                 3. Aquadest           1000 ml pH :7,4±0,2

2. Glukosa              10 gram

Medium TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar)

Komposisi :            1. Meat Extract                     3.   Gram                7. Na₂S₂O₃              0,5 gram

2. Yeast Extract                     3    gram                 8. Laktosa              10  gram

3. Pepton from Casein        15  gram                                9. Sukrosa              10  gram

4. Pepton from Meat           5    gram                 10. Glukosa           1    gram

5. NH₄ Fe (III) Citrat              0,5 gram                                11. Agar-agar        15  gram

6. NaCl                                    5    gram                 12. Aquadest        1000  ml

Medium DSI Agar (Double Sugar Iron Agar)

Komposisi sama dengan TSI Agar, kecuali :     1. Sukrosa              10 gram

2. Glukosa              1   gram                  pH :7,4±0,2

Medium SSI Agar (Single Sugar Iron Agar)

Komposisi sama dengan TSI Agar, kecuali Glukosa         10 gram                 pH :7,4±0,2

Medium Cystein/Cystine/Methionine Agar

Komposisi :            1. Meat Extract                                     3    gram 6. NaCl                    5    gram

2. Yeast Extract                                     3    gram 7. Na₂S₂O₃                     0,5 gram

3. Cystein/Cystine/Methionine         10  gram                8. Agar-agar          15  gram

4. Glukosa                                              10  gram                9. Aquadest           1000  ml

5. NH₄ Fe (III) Citrat                              0,5 gram                pH :7,4±0,2

Medium Simmon Citrate

Komposisi :            1. (NH₄) H₂ PO₄      1 gram                    5. Mg SO₄                                               0,2      gram

2. K₂HPO₄               1 gram                    6. BTB (Bromo Thymol Blue)              0,08    gram

3. NaCl                    5 gram                    7. Agar-agar                                          12-15 gram

4. Na Citrate          2 gram                    8. Aquadest                                           1000       ml

Medium Agar Citrate + Glukosa

Komposisi sama dengan Medium Agar Citrat hanya di tambah dengan Glukosa      1 gram

Medium Agar Citrate + Lactat

Komposisi sama dengan Medium Agar Citrat hanya di tambah dengan Na Laktat/Ca Laktat/Li Laktat sebanyak 1 gram

Medium Nitrifikasi

Komposisi :            1. K₂HPO₄/Na₂ HPO₄             13,5 gram              5. (NH₄)₂ SO₄          2,5   gram

2. KH₂PO₄                               0,7   gram              6. FeCl₃. 6 H₂O      14,4 gram

3. MgSO₄. 7 H₂O                   0,1   gram              7. CaCl₂. 7 H₂O      18,4 gram

4. NaHCO₃                              0,5   gram              8. Aquadest           1000     ml

Medium Denitrifikasi

Komposisi :            1. KNO₃                  2   gram                  3. CaCO₃                                 5   gram

2. Glukosa              10 gram                 4. Larutan Winogradksy     1000 ml                 pH :7,4±0,2

Isi Larutan Winogradksy :

1. K₂HPO₄                      5    gram                 4. Fe SO₄. 7H₂O     0,05 gram

2. Mg SO₄. 7 H₂O  2,5 gram                                5. Mn SO₄              0,05 gram

3. NaCl                    2,5 gram                                6. Aquadest           1000     ml

Medium Pati Agar

Komposisi :            1. Meat Extract                     3 gram    3. Agar-agar          15-20 gram

2. Pati (Soluble Strack)        2 gram    4. Aquadest           1000       ml           pH :7,4±0,2

Medium Nutrien Gelatine

Komposisi :            1. Meat Extract     3 gram    3. Gelatine             12-15 gram

2. Peptone            5 gram    4 Aquadest            1000       ml           pH :7,4±0,2

Medium Agar Susu Skim

Larutan A à komposisi :    1. Peptone            10     gram

2. Agar-agar          20     gram             pH :7,4±0,2

3. Aquadest           1000 gram

Larutan B à Susu Bebas Lemak 10% : komposisi :        1.Susu Skim           10 gram

2. Aquadest           100    ml

Kedua larutan di buat dan disterilkan secara terpisah. Setelah larutan A dimasukkan ke dalam cawan petri steril, setelah itu baru Larutan B ditambahkan sebanyak 1 ml secara aseptis.

Medium Selulosa Agar

Komposisi :            1. K₂HPO₄                      1 gram                    5. NaCl                    2         gram

2. Mg SO₄. 7 H₂O  1 gram                    6. Selulosa             10       gram

3. Na₂CO₃               1 gram                    7. Agar-agar          12-20 gram

4. (NH₄)₂ SO₄          2 gram                    8. Aquadest           1000       ml

Medium Nutrien Agar

Komposisi :            1. Meat Extract     3 gram                    3. Agar-agar          15-20 gram

2. Peptone            5 gram                    4. Aquadest           1000       ml           pH :7,4±0,2

Medium Nitrate Cair

Komposisi :            1. Meat Extract     3  gram                   3. KNO₃                  1  gram

2. Peptone            5  gram                   4. Aquadest           1000 ml                 pH :7,4±0,2

Medium Kentang Agar (Potato Dextrose/Glukosa Agar)

Komposisi :            1. Kentang                             200 gram               3. Agar-agar          15-20 gram

2. Dextrose/Glukose           20   gram               4. Aquadest           1000       ml           pH :7,4±0,2

Kentang di kupas dan di potong kecil-kecil, lalu di rebus sampai lunak (mendidih) à disaring dan diambil filtratnya, lalu filtrat ditambah dengan aquadest sampai 1000 ml à dicampur dengan Dextrose/Glukose + Agar-agar à dipanaskan.

Medium YMA (Yeast Mannitol Agar)

Komposisi :            1. Mannitol                            10  gram                                5. NaCl                                    0,1 gram

2. Extract Khamir                  0,2 gram                                6. Congo Red 1%                  2,5 gram

3. . K₂HPO₄                                     0,5 gram                                7. Agar-agar                          15  gram

4. Mg SO₄. 7 H₂O                  0,2 gram                                8. Aquadest                           1000  ml

Medium YGA (Yeast Extract Glukosa Agar)

Komposisi sama dengan medium YMA tetapi Mannitol diganti dengan Glukosa sebanyak 10 gram.

Medium YSA (Yeast Extract Sukrosa Agar)

Komposisi sama dengan medium YMA tetapi Mannitol diganti dengan Sukrosa sebanyak 15 gram.

Medium Urea

Komposisi :            1. Peptone            1 gram                    5. Phenol Red       0,012 gram

2. Glukosa              1 gram                    6. Agar-agar          12       gram

3. NaCl                    5 gram                    7. Aquadest           1000       ml

4. KH₂PO₄               2 gram                    pH : 6,8±0,2

Untuk kristal Urea 20 gram tidak disterilkan dengan Autoclave tetapi hanya dipanaskan pada suhu 70 ⁰C (bisa dengan Oven), sedangkan no:1-7 harus disterilkan dengan Autoclave.

Medium Urea (Metode Christensen)

Komposisi :            1. Peptone            1 gram                    4. Phenol Red       0,012 gram

2. NaCl                    5 gram                    5. Agar-agar          15-20 gram

3. KH₂PO₄               2 gram                    6. Aquadest           1000       ml

Media tersebut diatas disterilkan dengan Autoclave pada suhu 121 ⁰C selama 20 menit.

Medium Urea + Glukosa

Komposisi sama hanya di tambah Glukosa sebanyak 1 gram.

Medium Urea Cair

Komposisi sama hanya Agar-agar dihilangkan.

Medium Urea (yang Redimite/siap saji)

1.       Timbang Agar-agar (khusus untuk Urea) sebanyak 15 gram + 1000 ml aquadest à panaskan sampai larut à masukkan ke dalam Erlenmeyer à di cek pHnya (6,8±0,2) àlalu mulut Erlenmeyer ditutup dengan kapas à disterilkan (Autoclave suhu 121 ⁰C selama 15 menit)

2.       Timbang Kristal Urea sebanyak 29 gram à dipanaskan pada suhu ± 70 ⁰C selama 15 menit

3.       No. 1 dan 2 di campur secara aseptik (Campuran ini disebut medium Urea)

4.       Tuang campuran medium tersebut ke dalam tabung reaksi streril secara aseptis.

5.       Dinginkan dan media siap digunakan.

Medium Gliserol

Komposisi :            1. Extract Khamir  10 gram

2. Agar-agar          15 gram

3. Aquadest           1000 ml

Larutkan dulu bahan-bahan diatas, kemudian saring bila perlu; selanjutnya ditambah dengan Gliserol 20 gram. Disteril dengan Autoclave pada suhu 121 ⁰C selama 15 menit.

Medium Mannitol Phenol Red Agar

Komposisi :            1. D (-) Mannitol   10  gram                                4. Phenol Red       0,025 gram

2. Pepton               1    gram                 5. Agar-agar          15       gram

3. Yeast Extract     0,5 gram                                6. Aquadest           1000       ml

ph medium diatur (7,0 ±0,1) lalu disterilkan dengan Autoclave pada suhu 121 ⁰C selama 15 menit.

Medium MC BETH

Komposisi :            1. K₂HPO₄                      1 gram                    5. CaCl₂                   2    gram

2. MgSO₄.7H₂O     1 gram                    6. Kertas Filter      1 lembar

3. NaCl                    1 gram                    7. Aquadest           1000  ml

4. (NH₄)₂.SO₄          2 gram                    pH :7,4±0,2

Medium Glukonobacter Oxydans

Komposisi :            1. Glukosa              100 gram               3. Agar-agar          15   gram

2. Yeast Extract     10   gram               4. Aquadest           1000   ml               pH :6,8±0,2

Medium ini dipakai untuk menumbuhkan Acetobacter sp

Medium SSA (Staphylococcus Selektive Agar)

Komposisi :            1. Yeast Extract                     2,5 gram                                6. NaCl                    7,5 gram

2. Pepton from Casein        10  gram                                7. K₂HPO₄               5    gram

3. Gelatine                             30  gram                                8. Agar-agar          1,5 gram

4. Laktosa                              2    gram                 9 Aquadest            1000  ml

5. Mannitol                            10  gram

Medium VJA (Vogel Johnson Agar) = (Staphylococcus Selektive Agar)

Komposisi :            1. Pepton from Casein        10 gram 6. Glycine              10       gram

2. Yeast Extract                     5   gram  7. Phenol Red       0,025 gram

3. Mannitol                            10 gram 8. Agar-agar          13       gram

4. K₂HPO₄                               5   gram  9. Aquadest           1000       ml

5. Lithium Chlorida              5   gram

NB : Tiap 10 ml medium VJA harus ditambah 3-4 tetes Kalium Tellurit 1%.

Medium VJA (Vogel Johnson Agar) dan medium SSA (Staphylococcus Selektive Agar) dipakai untuk identifikasi Staphylococcus sp

Medium Glukosa Yeast Extract Agar

Komposisi :            1. Extract Khamir  5   gram                  4. Agar-agar          20 gram

2. Peptone            5   gram                  5. Aquadest           1000 ml

3. Glukosa              10 gram

Medium Streptococcus Selektive Agar

Komposisi :            1. Peptone                            5       gram              7. Glukosa              5              gram

2. Peptone from Casein      14,4 gram              8. Sodium Azide   0,2          gram

3. NaCl                                    4       gram              9. Crystal Violet    0,0002   gram

4. Na Citrate                          1       gram              10. Agar-agar        15           gram

5. L-Cistine                            0,2    gram             11. Aquadest        1000            ml

6. Na₂SO₃                               0,2    gram

Medium Lactobacillus Selektive Agar (Rogosa Agar)

Komposisi :            1.Peptone from Casein       10 gram                 7. Na Acetate                        15       gram

2. Yeast Extract                     5 gram                    8. MgSO₄                                0,575 gram

3. Glukosa                              20 gram                 9. Ferri Sulfate                      0,034 gram

4. KH₂PO4                              6 gram                    10. Manganase Sulfate        0,12   gram

5. NH₄ Citrate                        2 gram                    11. Agar-agar                        15       gram

12. Aquadest                        1000       ml

6. Polyoxy Ethylen Surbitol Monoblecite        1 gram                    pH : 5,5±0,2

Medium Dexstrine Cair

Komposisi :            1. Extract Dagaing                3 gram                    4. BTB 1%               1        ml

2. Peptone                            5 gram                    5. Aquadest           1000 ml

3. Dexstrine                          5 gram                    pH :7,0±0,2

Medium Jensen Agar

Komposisi :            1. Dextrosa            2 gram.                   6. Agar-agar          15  gram

2. Casein                0,2 gram.(yang telah dilarutkan dalam 10 ml NaOH 0,1 ml)

3. K₂HPO₄               0,5 gram                                7. Aquadest           1000  ml

4. MgSO₄. 7H₂O    0,2 gram               

5. FeCl₃. 6H₂O       sedikit                    pH medium :7,0±0,2

Medium Nitrate Cair

Komposisi :            1. Extract Daging  3 gram                    3. KNO₃                  1   gram

2. Peptone            5 gram                    4. Aquadest           1000 ml pH : 7,2±0,2

Medium Lactose Cair

Komposisi :            1. Extract Daging  3 gram                    4. Phenol Red 1,6%             1        ml

2. Peptone            5 gram                    5. Aquadest                           1000 ml

3. Laktosa              5 gram                    pH :7,0±0,2

Medium Lactose Agar

Komposisi :            1. Extract Daging  3 gram                    4. BTB 1%               1        ml

2. Peptone            5 gram                    5. Agar-agar          15 gram

3. Laktosa              5 gram                    6. Aquadest           1000  ml                                pH : 7,0±0,2

Medium untuk Reduksi SUSU

Reagent yang dipakai adalah              1. Methylen Blue 5%           0,005 gram

2. Aquadest                           100           ml

Medium Peptone Iron Agar

Komposisi :            1. Peptone                            15 gram                 5. Na₂S₂O₃. 5H₂O                   0,08 gram

2. Proteosa Peptone           5    gram                 6. Agar-agar                          20    gram

3. Fe NH₄ Citrate                   0,5 gram                                7. Aquadest                           1000     ml

4. K₂HPO₄                               1    gram                 pH : 7,0±0,2

Medium Sukrosa Triptone Cair

Komposisi :            1. Extract Daging  3 gram                    3. Sukrosa              5   gram

2. Triptone            5 gram                    4. Aquadest           1000 ml pH : 7,0±0,2

Medium EMB Agar (Eosine Methylene Blue Agar)

Komposisi :            1.Peptone from Casein       10 gram                 5. Eosin                                  0,4      gram

2. K₂HPO₄                               2   gram                  6. Methylen Blue                 0,065 gram

3. Laktosa                              5   gram                  7. Agar-agar                          15       gram

4. Sukrosa                              5   gram                  8. Aquadest                           1000       ml

Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.

Medium EA (Endo Agar)

Komposisi :            1. Peptone            10 gram                 5. Basic Fuchine   0,4 gram

2. Laktose              10 gram                 6. Agar-agar          15  gram

3. K₂HPO₄               3,5 gram                                7. Alkohol              40       ml

4. Na₂SO₃               2,5 gram                                8. Aquadest           1000  ml                                pH : 7,1±0,2

NB : Medium EA (Endo Agar) mengandung zat penghambat Na₂SO₃ dan Basic Fuchine.

Bila Laktosa negatip media berwarna merah muda dan bila Laktosa positip media berwarna merah tua/merah methalik karena bakteri meragi Fuchine membentuk Aldehide + Asam.

Proses oksidasi juga dapat menyebabkan Laktosa menjadi positip karena O₂ dapat memecah ikatan antara Fuchine dengan Sulfite, dimana Sulfite teroksidasi menjadi Sulfat. Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.

Medium MCA (Mac Conkey Agar)

Komposisi :            1. Peptone from Casein      17  gram                                6. Neutral Red                      0,03   gram

2. Peptone from Meat        3    gram                 7. Christal Violet                   0,001 gram

3. NaCl                                    5    gram                 8. Agar-agar                          15       gram

4. Lactose                              10  gram                                9. Aquadest                           1000       ml

5. Bile Salt                              1,5 gram                                pH : 7,1±0,2

NB : Medium MCA (Mac Conkey Agar) mempunyai zat penghambat Garam Empedu dan Kristal Violet.

Bila Laktosa positip media menjadi berwarna merah muda dan Laktosa negatip berwarna kuning. Contoh : bakteri E. Coli memfermentasi Laktosa selama 24 jam. Dalam 48 jam jika karbohidratnya (Glukosa) habis maka akan memecah Asam Amino menjadi NH₃ (basa) yaitu kuning. Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.

Medium Agar Darah

Komposisi :            1. NaCl                    5   gram                  4. Agar-agar          15 gram

2. Tryptone           10 gram                 5. Aquadest           1000 ml

3. Yeast Extract     5   gram                  pH : 7,0±0,2

NB : tiap-tiap 10 ml medium ini ditambah dengan 1 ml darah.

Medium Salmonelle Shigella Agar

Komposisi :            1. Extract Daging                  5   gram                  7. Ferri Citrate                      1              gram

2. Peptone from Meat        5   gram                  8. Brilliant Green                  0,0003   gram

3. Lactose                              10 gram                 9. Indikator Neutral Red     0,025      gram

4. Bile Salt                              8,5 gram                                10. Agar-agar                        15           gram

5. Na₂S₂O₃                              0,5 gram                                11. Aquadest                        1000            ml

6. Na Citrate                          10 gram                 pH : 7,0±0,2

NB : Pakai tabung reaksi steril panjang dan medium tidak perlu disterilkan.

Medium SSA (Salmonella Shigella Agar) mempunyai zat penghambat Brilliant Green & Bile Salt  (menghambat bakteri Gram Positip) serta  S₂O₃ & Citrate (menghambat bakteri golongan Coliform). Medium ini selektif untuk bakteri Salmonella dan Shigella. Bakteri Salmonella koloni berwarna Coklat dan ditengahnya ada titik Hitam; sedangkan Shigella koloni kecil-kecil dan berwarna Coklat.

Medium BSA (Bismuth Sulfite Agar)

Komposisi :            1. Extract Daging                  5    gram                 6. Brilliant Green                                  0,025 gram

2. Peptone from Meat        10  gram                                7. Bismuth Sulfide (Indikator)            8         gram

3. Glukosa                              5    gram                 8. Agar-agar                                          15       gram

4. K₂HPO₄                               4    gram                 9. Aquadest                                           1000       ml

5. FeSO₄                 0,3 gram

NB : Pakai tabung reaksi steril panjang dan medium tidak perlu disterilkan.

Medium BSA (Bismuth Sulfite Agar) mengandung zat penghambat Brilliant Green (menghambat  bakteri Gram Positip) dan Bismuth (menghambat bakteri Proteus dan bakteri golongan Coliform)

Koloni Salmonella : Mata ikan (Fish Eye)/Mata Kelinci (Rabbit’s Eye)àkoloni bulat, ditengah koloni warna hitam dan pinggirnya warna perak methalik. Warna Hitam terjadi karena Sulfite bereaksi dengan Ferro sedangkan warna Perak Methalik bereaksi dengan Bi²⁺.

Medium PSA (Pseudomonas Selektif Agar)

Komposisi :            1. Pepton from Casein        10  gram                                5. Glyserol             10 gram

2. Pepton from Meat           10  gram                                6. Agar=agar         15 gram

3. MgSO₄                                1,5 gram                                7. Aquadest           1000 ml

4. K₂HPO₄                               1,5 gram                                pH : 7,2

Medium S.I.M (Sulfida Indole Motilitas)

Komposisi :            1. Pepton from Casein        20  gram                4. Na₂S₂O₃              0,2 gram

2. Pepton from Meat           6    gram 5. Agar-agar          3    gram

3. NH₄ Iron (III) Citrat           0,2 gram                6. Aquadest           1000  ml                                pH : 7,3±0,2

Medium KIA (Kliger’s Iron Agar)

Komposisi :            1. Beef Extract                      3   gram                  7. Ferro Sulfat       0,2          gram

2. Yeast Extract                     3   gram                  8. NaCl                    5              gram

3. Peptone                            15 gram                 9. Na₂S₂O₃              0,3          gram

4. Protease Peptone           5   gram                  10. Phenol Red     0,024      gram

5. Laktose                              10 gram                 11. Agar-agar        12           gram

6. Dextrose                           1   gram                  12. Aquadest        1000       ml            pH : 7,4±0,2

Medium Simmon Citrate

Komposisi :            1. (NH₄)₂ H₂PO₄                     1 gram                    5. MgSO₄                0,2   gram

2. K₂HPO₄                               1 gram                    6. BTB                     0,08 gram

3. NaCl                                    5 gram                    7. Agar-agar          12    gram

4. Na Citrate                          2 gram                    8. Aquadest           1000     ml             pH : 6,8±0,2

Medium PAD (Phenyalanine Deaminase)

Komposisi :            1. Yeast Extract     1    gram                 6. L-Phenyalanine                                1              gram

2.( NH₄)₂ Sulfat      2    gram                 7. BTB                                     0,025      gram

3. K₂HPO₄               0,6 gram                                8. Agar-agar                          12-15     gram

4. KH₂PO₄               0,4 gram                                9. Aquadest                           1000       ml

5. NaCl                    2 gram                    pH : 6,9±0,2

Medium Ornitine Decarboxylase

Komposisi :            1. Peptone from Meat        5 gram                    4. BCP (Bromo Cresol Purple)            0,016 gram

2. Yeast Extact                       3 gram                    5. Ornitine                                             5         gram

3. Glukose                             1 gram                    6. Aquadest           1000 ml                 pH : 6,7±0,2

Medium Peptone Alkali

Komposisi :            1. Peptone from Meat        10 gram                 4. KH₂PO₄               1,5 gram

2. NaCl                                    5   gram                  5. Aquadest           1000  ml

3. K₂HPO₄                               9   gram                  pH : 8,8±0,2

Medium Arginine Dihidrolase

Komposisi :            1.Peptone from Meat         5 gram                    4. BCP (Bromo Cresol Purple)            0,016 gram

2. Yeast Extact                       3 gram                    5. Arginine Monohydrochloride       5         gram

3. Glukose                             1 gram                    6. Aquadest           1000 ml                 pH : 6,7±0,2

Medium Tryptone Cair

Komposisi :            1. Tryptone                           10 gram

2. NaCl                                    5   gram

3. Aquadest                           1000 ml                 pH : 7,3±0,2

Medium LIA (Lysine Irone Agar)

Komposisi :            1. Peptone from Meat        5       gram              6. Lysine Monohydrochloride           10    gram

2. Yeast Extact                       3       gram              7. BCP (Bromo Cresol Purple)            0,02 gram

3. Glukose                             1       gram              8. Agar-agar                                          12,5 gram

4 Na₂S₂O₃                               0,04 gram              9. Aquadest                                           1000     ml

5. NH₄Ferri Citrat                  0,05 gram

Medium LDS (Lysine Deaminasi Sulfhidrase)

Komposisi :            1. Peptone from Meat                        4,5 gram                                7. Na₂S₂O₃                                     0,2     gram

2. Peptone from Saymeal   2    gram                                 8. NH₄ Ferro Sulfat               0,2     gram

3. Yeast Extract                                     3    gram                 9. BCP                                     0,032 gram

4. NaCl                                                    5    gram                 10. Agar-agar                        6         gram

5. Glukosa                                              1    gram                 11. Aquadest                        1000       ml

6. Lysine Monohydrochloride           10  gram                                pH : 5,6±0,2

Medium Gula-gula

Komposisi :            1. Extract Daging  3 gram                    3. Phenol Red 1% 1        ml

2. Peptone            5 gram                    4. Aquadest                           1000 ml

Setelah semua komposisi itu larut, cek pHnya : 7,0±0,2, baru tambahkan Karbohidrat (Glukosa, Laktosa, Sukrosa, Maltosa, Dextrosa, dsb) sebanyak @ 5 gram ; dan jangan lupa diberi tanda pada tutup atau kapasnya nama-nama dari karbohidrat tsb.

Medium Mannitol Salt Phenol Red Agar

Komposisi :            1. Peptone from Meat        10  gram                                5. Phenol Red       0,025 gram

2. Extract Daging  1    gram                                 6. Agar-agar          15       gram

3. NaCl                                    7,5 gram                                7. Aquadest           1000       ml

4. Mannitol                            10  gram

Medium SGA 4%(Sabaraut Glukosa Agar 4%)     (* + Chlorampenicol      100 mg/1000 ml)

Komposisi :            1. Special Peptone                               10 gram                 3. Agar-agar          15 gram

2. Glukosa/Maltosa/Dextrosa            40 gram                 4. Aquadest           1000 ml

Catatan : Bila untuk menumbuhkan Bakteri tidak perlu di tambah Chlorampenicol.

                   Bila untuk menumbuhkan Jamur maka perlu di tambah dengan Chloramphenicol.

Medium MRS Agar (De Man Rogosa Sharpe)

Komposisi :            1. Peptone                            10 gram                 7. (NH₄)₂ Hydrogen Citrate 2      gram

2. Extract Daging                  5   gram                  8. Na Acetat          5      gram

3. Yeast Extract                     5   gram                  9. Mg SO₄               0,1   gram

4. Glukosa                              20 gram                 10. Mn SO₄            0,05 gram

5. K₂HPO₄                               2   gram                  11. Agar-agar        12    gram

6. Tween 80                          1   gram                  12. Aquadest        1000     ml

pH media : 6,5±0,2. Untuk yang redimite MRS Agar =62 gram/lt dan MRS Cair=50 gram/lt

Media Sulfite Irone Agar Base

Komposisi :            1. Peptone from Casein      15 gram                 4. FeSO₄ 1,4 gram

2. Yeast Extract                     10 gram                 5. Agar-agar          15 gram

3. Na₂SO₃                               0,5 gram                                pH : 6,9±0,2.

Medium Agar Darah Tellurite

Komposisi :            1. Peptone            10 gram                 3. Agar-agar          15 gram

2. NaCl                    5   gram                  pH : 7,8±0,2.

NB : medium disterilkan dengan Autoclave; dinginkan ad.Suhu ± 55 ⁰C;tambah dengan darah 5% dan 10 ml Kallium Tellurite 3,5%.

Medium Oxgal

Komposisi :            1. Extract Daging                  3 gram                    3. Bile Salt 8%

2. Peptone                            5 gram

Catatan : Medium Oxgal dapat juga dibuat dari 100 ml Medium Nutrien Cair + Bile Salt 8 gram

Medium Thioglycolat

Komposisi :            1. Peptone from Casein      15  gram                                6. Na Thioglycolate              0,5     gram

2. Yeast Extract                     5    gram                 7. Na Resozurine                  0,001 gram

3. Glukosa                              5,5 gram                                8. Agar-agar                          0,75   gram

4. Cysteine                            0,5 gram                                9. Aquadest                           1000       ml

5. NaCl                                    2,5 gram                                pH : 7,1±0,2.

Medium Lowenstein Jensen Agar

·         Larutan I berisi :   1. Asparagin          3,6 gram                                4. Mg Sulfate         0,024 gram

2. KH₂PO₄               2,4 gram                                5. Glyserine           12            ml

3. Mg Citrate         0,6 gram                                6. Aquadest           600          ml

Larutan I disterilkan dengan Autoclave pada suhu 115 ⁰C selama 15 menit.

·         Larutan II berisi : 100 ml Telur Ayam atau Telur Bebek yang sudah dikocok homogen dan secara aseptis.

Cara pembuatan larutan II :

1). Siapkan Erlenmeyer steril yang berisi Glass Parel atau Glass Bite (bila tidak ada Glass Parel atau  Glass Bite pakailah kerikil).

2). Telur Ayam atau Telur Bebek dicuci sampai bersih lalu direndam dalam Alkohol 70% selama ± 24 jam

·         Larutan III berisi : 20 ml Malacite Green steril

Larutan I+II+III dicampur secara aseptis, kemudian dibagi-bagikan kedalam tabung reaksi steril secara aseptis sebanyak @ 5 ml. Lalu tabung-tabung ini dipanaskan pada suhu 85 ⁰C selama 45 menit dalam inspirator.

Medium ini dipakai untuk menumbuhkan bakteri Mycobacterium tuberculosis.

Medium PAI

Komposisi :            1. Telur                  3 bagian

2. NaCl 0,85%        1 bagian

NB : cara membuat medium ini sama seperti membuat medium Lowenstein Jensen, lalu dipanaskan pada suhu 90 ⁰C selama 1 jam. Medium ini dipakai untuk menumbuhkan Corynebacterium difteri

Medium CSA (Corynebacterium Selective Agar (Cat: 5416) 500 gram)

Cara pembuatan : Timbang 42 gram medium CSA + 1000 ml Aquadestàpanaskan ad. Larut. Autoclave pada suhu 121 ⁰C selama 15 menit. Dinginkan sampai suhu ± 45-50 ⁰C setelah itu tambah dengan 50 ml Serum/lt dan 5-10 ml Kalium Tellurite 1% àcampur.

Medium untuk bakteri Asam Laktat : Medium Semi Solid MRS + Juice Tomato 20%

Cara pembuatan Juice Tomato 20% :

1.       Timbang Tomat sebanyak 20 gram

2.       Tambah 100 ml Aquadest

3.       Blender tomat tersebut

4.       Saring dan ambil air tomat yang jernih

Cara pembuatan medium MRS + Juice Tomato 20%

1.       Timbang medium MRS (Menurut kebutuhan)

2.       Tambahkan 100 ml cairan Juice tomat tersebut kedalam medium MRS

3.       Campur dan panaskan hingga larut

4.       Sterilkan medium tersebut dengan Autoclave pada suhu 121 ⁰C selama 15 menit

Medium untuk bakteri Pediococcus halophyllus : Medium MRS + NaCl 5%

Cara pembuatan NaCl 5% :

1.       Timbang kristal NaCl sebanyak 5 gram

2.       Tambah dengan aquadest 100 ml

3.       Campur hingga larut

Cara pembuatan medium MRS + NaCl 5%

1.       Timbang medium MRS (Menurut kebutuhan)

2.       Tambahkan 100 ml larutan NaCl 5% tersebut kedalam medium MRS

3.       Campur dan panaskan hingga larut

4.       Sterilkan medium tersebut dengan Autoclave pada suhu 121 ⁰C selama 15 menit

NB : Semua bakteri yang ditanam pada medium MRS hanya bertahan ± 2 minggu, sehingga sebelum 2 minggu bakteri tersebut perlu diremajakan.

Macam-macam bakteri yang memakai medium MRS + Juice Tomato 20%; MRS + NaCl 5%; dan TSA (Tryptone Soya Agar) adalah :

1.       Leuconostoc mesenteroides               FNCC : 0023          Medium TSA

2.       Acetobacter acetti                               FNCC : 0016          Medium TSA

3.       Lactobacillus bulgaricus                     FNCC : 0041          Medium MRS + Juice Tomato 20% à suhu pertumbuhannya 43-46 ⁰C

4.       Lactobacillus plantarum                    FNCC : 0027          MRS + Juice Tomato 20%

5.       Pediococcus halophyllus                     FNCC : 0032          MRS + NaCl 5%

6.       Streptococcus thermophyllus            FNCC : 0015          TSA à suhu pertumbuhannya 43-45 ⁰C

7.       Staphylococcus epidermidis               FNCC : 0048          TSA

8.       Enterococcus faecium                          FNCC : 0014          TSA

9.       Staphylococcus aureus                       FNCC : 0047          TSA

10.    Pseudomonas aeruginosa                  FNCC : 0063          TSA

11.    Bacillus cereus                                      FNCC : 0057          TSA

12.    Bacillus subtilis                                     FNCC : 0003          TSA

13.    Salmonella thypynum                         FNCC : 0050          TSA

14.    Lactobacillus acidophyllus                 FNCC : 0042          Medium MRS + Juice Tomato 20% à suhu pertumbuhannya 37-45 ⁰C

15.    Streptococcus lactis dan Streptococcus eremoris à suhu pertumbuhannya 25 ⁰C

Catatan : 1. NRRL : Nothern Regional Reaserch Laboratory.

   2. ATCC : American Type Culture Colections.

   3. FNCC : Farming National Culture Colection.

Macam-macam indikator pH yang biasa dipakai untuk pembuatan medium :

Nama Indikator                           Konsentrasi              Nilai pH                 Perubahan warna (Asam ke basa)

1. Thymol Blue                                      0,04%                     1,2 - 2,8                 Merah ke Kuning

2. Methyl Orange                                 0,05%                     3,1 - 4,4                 Kuning ke Biru

3. Brom Phenol Blue                           0,48%                     3,1 – 4,7                                Kuning ke Biru

4. Brom Cresol Green                         0,04%                     3,8 – 5,4                                Kuning ke Biru

5. Methyl Red                                       0,02%                     4,2 – 6,3                                Merah ke Kuning

6. Klor Fenol Red                                 0,04%                     5,1 – 6,7                                Kuning ke Merah

7. Brom Cresol Ungu                           0,04%                     5,4 – 7,0                                Kuning ke Ungu

8. Brom Thymol Blue                           0,04%                     6,1 – 7,7                                Kuning ke Biru

9. Phenol Red                                       0,02%                     6,9 – 8,5                                Kuning ke Merah

10. Cresol Red                                      0,02%                     7,4 – 9,0                                Kuning ke Merah

11. Thymol Blue                                   0,04%                     8,0 – 9,6                                Kuning ke Biru

12. Phenolpthlain                                                0,10%                     8,3 – 10                 Tanpa warna ke Merah

Macam dan cara pembuatan Indikator :

1.       Methyl Orang (MO) : 0,5 gram MO bebas asam + 1000 ml aquadest, lalu disaring

2.       Methyl Red (MR) : 1 gram MR bebas asam + 1000 ml aquadest panaskan atau larutkan dalam 600 ml alkohol + 400 ml aquadest

3.       Phenolpthlain (PP) : 5 gram PP + 500 ml alkohol + 500 ml aquadest

4.       Thymolphthalein (TP) : 0,4 gram TP + 600 ml alkohol + 400 ml aquadest

5.       α – Naphtholphthalein (α – NPt) : 1 gram α – NPt + 500 ml alkohol + 500 ml aquadest

6.       Methyl Yellow (MY) : 1 gram MY dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80%

7.       Netral Red (NR) : 1 gram NR dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80%

8.       Congo Red (CR) : 1 gram CR dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80% atau 1000 ml aquadest

Indikator yang mempunyai gugus Sulphonephthalein biasanya bersifat asam dan dapat larut dalam aquadest dengan penambahan NaOH.

Penambahan NaOH bertujuan untuk menetralkan potensial asam Sulphanilat.

9.       Bromo Phenol Blue (BPB) : 1 gram BPB + 15 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

10.    Bromo Cresol Green (BCG) : 1 gram BCG + 14,4 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

11.    Bromo Cresol Purple (BCP) : 1 gram BCP + 18,6 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

12.    Chloro Phenol Red (CPR) : 1 gram CPR + 23,6 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

13.    Bromo Thymol Blue (BTB) : 1 gram BTB + 16 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

14.    Phenol Red (PR) : 1 gram PR + 16 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

15.    Thymol Blue (TB) : 1 gram TB + 21,5 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

16.    Cresol Red (CR) : 1 gram CR + 26,2 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

17.    Meta Cresol Purple (MCP) : 1 gram MCP + 26,2 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest

18.   Indikator Universal :

a.        0,25 gram Bromo Thymol Blue (BTB) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

b.       0,025 gram Thymol Blue (TB) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

c.        0,625 gram Methyl Red (MR) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

d.       0,5 gram Phenolphthalein (PP) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest

Macam dan cara pembuatan reagent

1.       Reagent EHRLICH.

a.        Ehrlich A :      - Paradimethyl amino benzaldehide 2 gram

- Alkohol 95% / spiritus fortior 95%                 190  ml

- HCl pekat/HCl cone                                           40    ml

b.       Ehlich B :        - Kalium Persulfat (K₂S₂O₈) jenuh dalam aquadest

2.       METHYL RED : timbang 1gram Methyl Red tambah dengan 300 ml Alkohol 95% dicampur sampai larut; setelah larut baru di tambah dengan 500 ml aquadest.

3.       H₂O₂ 3% : ambil 10 ml H₂O₂ pekat (30%) tambah dengan 90 ml aquadest.

4.       KOH 40% : timbang 40 gram kristal KOH tambah dengan 100 ml aquadest.

5.       Reagent BARRIT : timbang 5 gram serbuk α-Napthol lalu tambah dengan 95 ml Alkohol 95%.

6.       Reagent NESSLER : HgCl₂ + KI sampai mengendap Jingga tepat larut + NaOH (penambahan NaOH berhenti jika ditambah NH₄Cl terjadi endapan Coklat).

7.       Reagent ZN (Ziel Nellson)

ZN A :     Larutan A : timbang 0,3 gram Basic Fuchine + 10 ml Alkohol 95%.

Larutan B : timbang 5 gram Phenol + 95 ml Aquadest.

Lalu larutan A dan Larutan B dicampur.

ZN B :      Alkohol Asam 3% : ambil 3 ml HCl 37% (HCl Pekat/cone) atau ambil 5 ml H₂SO₄ 36 N (H₂SO₄ pekat/cone) + 100 ml Alkohol 95%.

ZN C :      Timbang 0,3 gram serbuk Methylen Blue + 30 ml Alkohol 95% diaduk sampai larut; lalu tambah dengan 100 ml Aquadest, aduk sampai larut setelah itu disaring.

8.       Cat GRAM

a.        Gram A : Larutan 1 : timbang 2 gram Kristal Violet + 20 ml Alkohol 95%

 Larutan 2 : timbang 0,8 gram NH₄ Oksalat + 80 ml Aquadest.

 Campur larutan 1 dan larutan 2.

b.       Gram B : timbang 1 gram kristal Iodine + 2 gram kristal KI; dicampur dan digerus;

Setelah tercampur baru tambah 300 ml Aquadest.

c.        Gram C : ambil 700 ml Alkohol 95% + 300 ml Aceton.

d.       Gram D : timbang 0,25 gram serbuk Safranin + 10 ml Alkohol 95% campur sampai

 larut lalu tambah dengan 100 ml Aquadest.

9.       KARBOL FUCHINE : ambil 10 ml larutan jenuh Fuchine dalam Alkohol 95% + 90 ml Fenol 5%.

10.   LAKTOFENOL:

Isi :          1. Kristal Fenol      20 gram                 3. Gliserine            40 ml

2. Asam Laktat      20      ml                 4. Aquadest           40 ml

11.   LAKTOFENOL COTTON BLUE:

Isi :          1. Kristal Fenol      20 gram                 4. Cotton Blue       0,05 gram

2. Asam Laktat      20      ml                 5. Aquadest           40         ml

3. Gliserine            40      ml

12.   MALACHITE GREEN 5% : timbang 5 gram Kristal Malachite Green + 100 ml Aquadest

13.   MORDAN

Isi :          1. Tanin 20%         2 ml        3. Larutan jenuh Al K(SO₄)₂ atau Tawas (Al(SO₄)₂           5 ml

2. HgCl₂ jenuh       2 ml

14.   NIGROSIN : timbang 10 gram serbuk Nigrosin; larutkan Nigrosin dalam 100 ml aquadest, panaskan sampai mendidih selama 30 menit, tambah 0,5 ml Formalin (sebagai pengawet) campur, lalu saring dengan kertas saring.

15.   Reagent NEISSER :

o    Neisser A : isi        1. Methylen Blue                 0,3 gram                                2. Alkohol 95%        6     ml

3. Asam Acetat Glacial         15   ml                    4. Aquadest panas 285 ml

o    Neisser B : isi        1. Kristal Violet                     1 gram                    2. Alkohol 95%     10 ml

3. Aquadest panas               300  ml

o    Neisser C : isi        I. Bismark Brown : 1 gram + Aquadest panas : 500 ml.

II. Chrysoidine : 1 gram + Aquadest panas : 300 ml.

III.Vesuvine : 1 gram + Aquadest panas : 500 ml.

NB : Untuk Neisser C : PILIH SALAH SATU SAJA.(Pengecatan ini dipakai untuk pewarnaan Granula)

16.   ASAM ACETAT  5% : ambil 5 ml Asam Acetat Glacial (99,7%) + 100 ml Aquadest.

17.   ASAM BORAT  0,2 N : timbang 12,4 gram kristal Asam Borat pekat + 1000 ml Aquadest.

18.   ASAM NITRAT  10% : ambil 14,5 ml HNO₃ pekat (69%) + 100 ml Aquadest.

19.   CuSO₄  20% : timbang 20 gram kristal CuSO₄.5H₂O + 100 ml Aquadest.

20.   FENOL  5% : timbang 5 gram kristal Fenol + 100 ml Aquadest.

21.   GLISERINE  5% : ambil 5,26 ml + 100 ml Aquadest.

22.   HCl  1% : ambil 1 ml HCl pekat (37%) + 100 ml Aquadest.

23.   HCL  0,1N : ambil 10 ml HCl pekat (37%) + 1000 ml Aquadest.

24.   HgCl₂ : timbang 0,1 gram kristal HgCl₂  + 100 ml Aquadest.

25.   H₂O₂  3% : ambil 10 ml H₂O₂ pekat (30%) + 90 ml Aquadest.

26.   K₂HPO₄/Na₂HPO₄  0,2 N: timbang 34,9 gram kristal K₂HPO₄/Na₂HPO₄+1000 ml Aquadest.

27.   NaCl  0,85% : timbang 0,85 gram kristal NaCl + 100 ml Aquadest.

28.   NaOH  1N : timbang 40 gram kristal NaOH + 1000 ml Aquadest.

29.   NaOH  0,2N : timbang 80 gram kristal NaOH + 1000 ml Aquadest.

30.   VASPAR : timbang 50 gram Vaseline + 50 gram Parafine.

31.   IODIUM  10% : timbang 10 gram kristal Iodium (I₂) + 20 gram kristal KI dicampur dan digerus

sambil diberi Aquadest 100 ml perlahan-lahan.

32.   Larutan Pencuci (K₂Cr₂O₇) : Timbang 4,9 gram kristal K₂Cr₂O₇ + 100 ml Aquadest campur hingga homogen lalu tambah secara pelan-pelan cairan H₂SO₄ pekat/cone (sama banyak).

Nb : jangan dibalik cara masukkannya.

33.   Larutan STANDART BROWN :

Isi :          BaSO₄  1% dan Na Citrate  1%

Cara :      1. Campurlah 7 ml BaSO₄  1% dengan 49 ml NaCitrate  1%.

2. Bagilah campuran ini dalam 10 tabung reaksi steril, masing-masing 1 ml, 2 ml, 3 ml, dan seterusnya sampai tabung ke 10 yang berisi 10 ml.

3. Tambahkan dalam masing-masing tabung Na Citrate  1% sehingga volume masing-masing   tabung menjadi 10 ml.

34.   STANDART BROWN  III : 0,5 ml BaCl₂.2H₂O  1,17% + 99,5 ml H₂SO₄ (0,36 N) 1%

35.   Larutan LDF (Larutan Dapar Fosfat = Larutan Buffer Fosfat)

a.       LDF  I :   1. K₂HPO₄               1 gram                    2. KH₂PO₄               4 gram

3. Aquadest           300 ml                    pH : 6,0±0,1

b.       LDF  II :  1. K₂HPO₄               16,730 gram         2. KH₂PO₄               0,5        gram

3. Aquadest           1000         ml         pH : 8,0±0,1

(NB : pengaturan pH dibuat dengan Asam Fosfat 18N dan KOH 10N yang sudah diencerkan dengan aquadest steril sampai 500 ml)

36.   Membuat HCl  25% sebanyak 100 ml

Cara :      konsentrasi HCl pekat = 37%

Pakai Rumus : (VN)₁ = (VN)₂

        37               25                               V₁. 37     

V₁. ------ = 100.------              à            --------  =  25          à            37.V₁ =  2500

100               100                                100

          2500

V₁ = --------- = 67,6                à            V₁ = 67,6 ml.

           37

Jadi dipipet HCl pekat (37%) sebanyak 67,6 ml lalu ditambah dengan 32,4 ml Aquadest.

Mikroflora pada permukaan tubuh manusia

1.       Kulit : Stap. epidermidis, Stap. aureus, Strepto. viridans, Corynebacterium sp, Escherichia sp, Aerobacter sp, Mycobacterium sp, Jamur dan Ragi.

2.       Mata : Stap. epidermidis, Strepto. viridans, Neisseria sp, Corynebacterium sp.

3.       Hidung dan Tenggorokan : Stap. epidermidis, Stap. aureus, Strepto. viridans, Diplococcus pneumoniae, Neisseria sp, Corynebacterium sp, Haemophilus sp.

4.       Mulut : Stap. epidermidis, Stap. aureus, Strepto. viridans, Lactobacillus sp, Actinomyces sp, dan Ragi.

5.       Esofagus : tidak ada secara tetap, karena kehadirannya selalu terbawa bersama makanan.

6.       Lambung : Escherichia sp, Aerobacter sp, Proteus sp, Pseudomonas sp, Bacteriodes sp, Clostridium sp, Protozoa sp, Jamur dan Ragi.

7.       Vagina wanita normal : Haemophilus vaginalis, Corynebacterium sp, Mycoplasma sp, E. Coli, Lactobacillus sp, Streptococcus sp, Strepto. faecalis, Stap. aureus, Candida sp, dan bakteri dari jenis anaerobic.